Sérstök lest sem keyrir frá Suðurskautslandinu til frumskógarins gæti hætt að vera til og er ástæðan vegna hrörnunar á járnbrautarteinum. Dýrin, sem óttuðust að missa eina flutninginn sem gerir þeim kleift að ferðast, leituðu til Diego um hjálp hjá Go Diego Go! Diego's Railroad Rescue. Strákurinn er tilbúinn til að hjálpa og tekur þig þátt í framkvæmd áætlunar sinnar. Það felst í því að lagfæra veginn en fyrst þarf að setja öll dýrin í vagnana. Farþegar samþykkja að ferðast aðeins í félagsskap sinnar tegundar, þannig að það er sérstakur vagn fyrir mörgæsir, dádýr, björn og svo framvegis. Þegar búið er að koma öllum dýrunum fyrir mun lestin hefja ferð sína og fyrir hvert stopp verður þú að setja saman veginn eins og þraut með því að snúa einstökum köflum í Go Diego Go! Diego's Railroad Rescue.
